Q-PCR

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isalix
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Q-PCR

10 janvier 2021, 10:29

Bonjour !

Dans mon cours, j'ai noté que la Q-PCR permettait de "calculer le nombre de copies de gènes que nous avions au départ" pour après déterminer la charge virale par exemple. Mais je n'ai pas compris comment on faisait, ni comment fonctionnait l'agent fluorescent dont le professeur nous a parlé.

Merci d'avance ! :)
Dernière modification par isalix le 13 janvier 2021, 20:09, modifié 1 fois.

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Vins'itu
CM L.AS
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Re: Q-PCR

10 janvier 2021, 11:34

Saluuuut isalix! J'espère que tu vas bien :)

:?: Tout d'abord, ce que tu as écris dans ton cours est correct, la technique de la PCR quantitative (abrégée qPCR) permet de déterminer la quantité initiale d'ADN donc de déterminer le nombre de virus présents par ml de sang, c'est ce qu'on appelle la charge virale.

Maintenant revoyons ensemble comment faire cette fameuse technique de qPCR:

:arrow:La PCR c'est une méthode d'amplification qui permet à partir d'une copie d'ADN, d'avoir une quantité énorme de cette copie à la fin. Retiens biens que la quantité d'ADN est doublée à chaque cycle de la PCR. Si on en suit cette logique, on peut alors comprendre que la synthèse d'ADN est exponentielle au cours du temps (premier cycle j'ai 1 copie de l'ADN, 2ème cycle j'ai 2 copies, 3ème cycle j'ai 4 copies.... je te mets ci-dessous l'image de la fonction exponentielle pour que tu y vois plus clair). On dit que cette technique suit une règle géométrique/mathématique.

:?: Mais comment analyser la quantité d'ADN d'intérêt de départ présente dans le tube? (après avoir par exemple prélevé le sang d'un patient)


:arrow: On va rajouter un agent qui permet que l'ADN soit fluorescent quand il est sous forme double brin. L’ADN est sous forme double brin que lorsqu’il a été recopié par l’enzyme utilisé en PCR, c’est-à-dire la Taq ou Thermus Aquaticus ADN polymérase. C'est donc cette fluorescence qui est l'essence même de la qPCR.

:arrow: Donc plus il y a de l'ADN de synthétisé, plus on observe de la fluorescence liée à l'interaction de l’agent chimique avec l’ADN double brin. Cela nous permet de tracer une courbe d’amplification pour déterminer la quantité d'ADN de départ.

J'espère que mon explication est claire, si tu as une autre question n'hésites pas j'y répondrai avec joie!
La team Biocell t'envoie toute sa force et te souhaite bon courage! bisous ;) <3<3
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:!: Courage les loulous, ne lachez rien :!:

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isalix
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Re: Q-PCR

13 janvier 2021, 20:07

D'abord merci pour ta réponse :) ! C'était très clair mais j'ai une autre petite question ! Si j'ai bien compris, ça veut dire que selon le "niveau" de fluorescence, on sait combien d'ADN a été synthétisé avec la PCR, et c'est cette quantité qui nous permet de retrouver la quantité d'ADN de départ ?
J'espère que j'ai été assez claire :?

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Thaïo
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Re: Q-PCR

14 janvier 2021, 13:22

Bonjour isalix !

Ce que tu as dit est tout à fait correct ! ;)

:arrow: D'une part, le niveau de fluorescence est corrélé à la quantité d'ADN. Ainsi, plus la fluorescence est élevée, plus la quantité d'ADN double brin étudiée est élevée. Pour répondre à ta première question, selon le niveau de fluorescence, on sait donc quelle quantité d'ADN a été synthétisée grâce à notre Q-PCR.

:!: Pour autant, nous ne connaissons pas encore la quantité initiale d'ADN.

:arrow: Pour connaître la quantité initiale d'ADN, il te faut tracer la courbe d'amplification. Cette courbe représente l'augmentation exponentielle de la quantité d'ADN au cours de la Q-PCR ! Pour la tracer, il suffit d'évaluer le niveau de fluorescence (= quantité d'ADN) au cours de chaque cycle de la Q-PCR. Le début de la courbe indique alors la quantité initiale d'ADN présente dans ton tube d'analyse !

J'espère avoir été assez précis ! N'hésite surtout pas si ce n'est pas encore assez clair ;) .
La Team Biocell se joint à moi pour te souhaiter bon courage ! Bonne journée :) .

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isalix
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Re: Q-PCR

15 janvier 2021, 06:18

C'est bon j'ai tout compris merci beaucoup :D

Verrouillé

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