Microscopies

[enisayb]

coucou !
je me rend compte en refaisant les colles que les caractéristiques des microscopies ne sont pas bien claires pour moi :
j'ai du mal a comprendre, par rapport a l'immunomarquage il est utilisé en Mo confocal, ou bien en Mo classique ?

[Amatheia]

Salut enisayb !

En fait, l'immunofluorescence est une technique d'immunomarquage, dont le principe est de faire appel à un anticorps primaire qui va reconnaître la protéine d'intérêt, et à un anticorps secondaire qui reconnaît l'anticorps primaire. C'est l'anticorps secondaire qui possède le marqueur que l'on va pouvoir détecter en microscopie.

Attention : Ce qu'on observe au microscope c'est le marqueur de l'AC secondaire qui est attaché à l'AC primaire lui-même attaché à la protéine. A aucun moment on ne voit la protéine.

En microscopie optique, la molécule marqueur de l’anticorps secondaire peut être :

• Une enzyme : Comme une peroxydase qui pourra alors transformer un substrat incolore en
  substrat coloré.

• Une molécule fluorescente : une fois excitée par un rayon lumineux, elle émet une
  fluorescence observable à l'œil.

Ce sont alors des immunomarquages que l'on peut utiliser en microscopie optique classique.

Concernant la microscopie confocale, c'est une technique de microscopie à fluorescence plus évoluée, qui utilise des lasers et permet notamment vision de l'intérieur des cellules à haute résolution. En somme, c'est la méthode microscopie à fluorescence la plus évoluée.

NB : En ME, la molécule marqueur peut être une bille d’or : elle est opaque aux électrons (e-), là où la bille est présente, les électrons sont arrêtés.


Pour répondre très clairement à ta question, l'immunofluorescence est utilisée en microscopie classique et en microscopie confocale, qui est la technique de microscopie à fluorescence la plus sophistiquée.

J'espère avoir répondu à ta question ! N'hésites pas à reposer une question si ce n'est toujours pas très clair

Ne lâche rien pour cette dernière ligne droite, toute la team biocell te souhaite plein de courage et passe un bon week-end <3