marquage

[sanaa]

salut,
je n'ai pas compris comment fonctionne le marquage par hybridation visible et immunohistochimie
merci

[Anna Vnf]

Salut à toi !
Deux petits points à aborder ici et qui sont assez faciles à comprendre, promis :

-l'immunohistochimie : c'est une technique de marquage qui permet d'étudier certaines protéines selon un procédé de révélation de la liaison antigène-anticorps. Ce qu'il faut comprendre ici c'est que la protéine est considérée comme l'antigène et c'est cet antigène que l'immunohistochimie cherche à mettre en évidence. Pour se faire, des anticorps primaires sont placés en présence de la protéine et vont alors se lier ou non à elle selon une réaction antigène-anticorps. Cela va dépendre de la spécificité qu'ont les anticorps pour la protéine. Comme les protéines sont de très petits éléments biologiques et sont souvent retrouvées en faible quantité dans les dosages ou les prélèvements, cela rend difficile la mise en évidence et l'observation des liaisons antigène-anticorps qui se sont formées.On va donc amplifier le signal de ces dernières pour pouvoir observer quelque chose. La révélation de ces liaisons ne se voit pas à l'oeil nu, il est donc indispensable de les mettre en contact avec des enzymes qui peuvent réagir en colorant la liaison protéine-anticorps ou un fluorochrome qui permettra d'observer une fluorescence au microscope à fluorescence (dans ce cas, on appelle ça de l'immunofluorescence).

-L'hybridation in situ : Le but est de révéler l'ADN et/ou l'ARN en révélant leur séquence nucléique. Dans un premier temps, l'ADN est dénaturé par chauffage pour séparer les deux brins de l'hélice. Des sondes spécifiques sont ajoutées dans le milieu. En effet, elles sont composées d'acide nucléiques complémentaires à ceux du brin d'ADN et vont donc pouvoir s'y accrocher. Ces sondes ne servent à rien et la révélation ne se peut faire si elles ne sont pas couplées à des sondes froides qui entraînent des réactions colorées et donc visible, une enzyme ou un fluorochrome. Par exemple, dans la méthode FISH (Fluorescent In Situ Hybridization) un fluorochrome est ajouté aux sondes ce qui va permettre la révélation des ADN ou ARN au microscope à fluorescence.

J'espère que ça aura répondu à ta question et que ça a pu t'aider. N'hésite pas à revenir vers nous si tu as une interrogation sur cette explication. Bon courage !