Hello Burger Lover
La chromatographie d'exclusion :
Elle sert à
séparer les les peptides selon leur taille (et donc selon leur masse, les deux étant liées).
Pour cela, la colonne est remplie de billes poreuses qui contiennent un réseau de petits canaux.
On définit le
point de cut-off en kDa : il s'agit de la limite à partir de laquelle les peptides sont trop gros pour rentrer des les pores de la bille.
Au final, les peptides avec une masse supérieure au point de cut-off seront élués plus rapidement tandis que les peptides avec une masse inférieur au point de cut-off seront élués plus lentement car il vont passer par les pores des billes, ce qui va les ralentir.
Je te conseil cette petite vidéo pour mieux visualiser comment cela se passe :
https://www.youtube.com/watch?v=msJ47Yso2ec
La chromatographie d'affinité :
Elle repose sur l
'utilisation d'anticorps pour réaliser une
liaison très spécifique avec le peptide que l'on veut purifier.
Elle se déroule en trois étapes :
- chromatographie d'affinité.JPG (45.71 Kio) Consulté 2079 fois
1ère étape :
Dépôt / Fixation
On va introduire dans la colonne un mélange du peptide qu'on veut purifier (ici le rond avec un trou carré) et de différent contaminants (ici les ronds). Il va y avoir des anticorps fixés sur la colonne (en noir) qui vont fixer spécifiquement les peptides qui nous intéressent.
2ème étape :
Lavage / Purification
On va rincer la colonne pour être sûr que seul les peptides fixer aux anticorps restent dans la colonne.
3ème étape :
Elution
On va libérer les peptides fixés au anticorps, pour cela on peut par exemple augmenter la force ionique ou le pH (sur l'image on peut voir l'utilisation de compétiteur qui ont une meilleur affinité pour les anticorps).
Ainsi, on peut récupérer les peptides qui nous intéressent avec une grande spécificité.
Voila, n'hésite si tu as d'autres questions.
La team bioch est de tout cœur avec toi
<3
TEAM BIOCH 2020
REF BIOCH 2021