Salut rian555 !
Nous allons reprendre ensemble toutes ces notions !
Il arrive en biologie que l'on veuille étudier un gène d'intérêt, et pour cela on va avoir recours à la PCR. La
PCR est une technique d'
amplification de l'ADN.
En effet, une molécule d’
ADN possède
plusieurs gènes et étudier un unique gène parmi tout ceux que la molécule possède revient à chercher une aiguille dans une botte de foin.
Ainsi, la
PCR va permettre d’
amplifier des
milliards de fois, et de façon fidèle, le gène que nous cherchons à étudier !
Il est plus facile de trouver une aiguille lorsqu’il y en a des milliards au sein de la botte de foin.
Donc le but de faire une
PCR est d'
amplifier la séquence d'un gène d'intérêt afin de le retrouver parmi tous les gènes du génome et pouvoir l'
étudier facilement.
Mais lorsqu'on fait une
PCR, l'ADN est amplifié suivant une règle mathématique particulière : le gène d'intérêt est
doublé à chaque PCR. Cette règle va nous permettre de
doser de l'ADN. Ainsi, lorsqu'on cherche à doser de l'ADN, on va faire ce qu'on appelle une
Q-PCR.
Elle repose donc sur le fait qu'au cours d'une PCR, l'ADN va être
amplifié de façon exponentielle et suivant une règle particulière qui permet aux biologistes de
déterminer la quantité initiale d'ADN.
Pour effectuer une
Q-PCR, on va ajouter un agent qui rend l'
ADN fluorescent.
- Lorsque notre ADN est sous forme monobrin, l'agent chimique ne va pas le rendre fluorescent.
- Lorsque notre ADN est sous forme double brin, donc lorsque celui a été recopié par une enzyme, la Taq polymerase, utilisée pour la PCR, afin de l'amplifier, l'agent chimique va le rendre fluorescent.
Cela veut dire que plus on va amplifier notre ADN, plus on aura de quantité d'ADN fluorescent. On peut alors placer ces valeurs de quantité d'ADN sur une courbe, et extrapoler à l'aide de cette courbe la quantité initiale d'ADN présente au départ.
La
Q-PCR va être utile dans le cadre d'un
suivi de traitement d'un patient atteint d'un virus comme l'hépatite B.
N'hésites pas à demander si tu as des questions sur cette partie, je ne vais pas te la détailler ici car ta question ne porte pas vraiment dessus mais relance moi si ces précisions t'intéressent.
La
PCR et la
q-PCR entrent dans le cadre de l'étude de l'
ADN.
Mais on peut également vouloir étudier l'
ARN. C'est par exemple le cas lorsqu'on fait des tests PCR pour le (ou la ?
) covid, qui est un
virus à ARN. On va alors réaliser une
RT-PCR si on veut
étudier un ARNm particulier, ou une
RT-PCR quantitative lorsqu'on cherche à
mesurer l'expression des gènes.
Lors d'une
RT-PCR, on va tout d'abord
extraire tout l'ARN d'une cellule normale, ou tumorale, ou d'une cellule infectée par un virus. On va ensuite avoir recours à la
transcriptase inverse, qui est une enzyme particulière qui va permettre de
re-synthétiser de l'ADN à partir d'un ARN. On appellera cet ADN nouvellement synthétisé de l'
ADN complémentaire (ADNc). Puis grâce à cet ADNc, on va pouvoir procéder ensuite à une PCR "classique" comme je te l'ai détaillée au dessus.
Petit récap' !
- Une PCR permet d'amplifier un gène d'intérêt, donc de l'ADN, afin de l'étudier plus facilement.
- Une q-PCR (ou PCR quantitative) permet de doser de l'ADN grâce à un agent chimique qui le rend fluorescent. Cette techniquement permet de retrouver la quantité d'ADN initiale présente dans le tube à essai.
- Une RT-PCR est une PCR mais à partir d'un ARN et non d'ADN. Elle nécessite la transcriptase inverse, qui va permettre de synthétiser de l'ADNc à partir d'un ARNm pour ensuite procéder aux techniques de PCR habituelles.
- Enfin, une RT-PCR quantitative est une RT-PCR qui va permettre de connaître le niveau d'expression des gènes en quantifiant le nombre d'ADNc (et donc d'ARNm!) présent dans une cellule.
Voilà, j'espère que c'était assez clair et que j'ai pu répondre à ta question. N'hésites pas à me relancer s'il y a toujours des points d'ombre !
Toute la team biocell est avec toi, lâche rien! On te souhaite plein de courage !!
<3