Forum du Tutorat de Santé de Tours

Saluuuut j'espère que vous allez bien !

Alors voilà pendant l'ECB y'a eu un qcm que j'ai pas trop bien compris, serait-il possible d'avoir une petite explication pour m'éclaircir dessus ?

Merciiii beaucoup !!!!!

Salut !!!
Alors tout d'abord je te rassure ce QCM n'est vraiment pas simple. Mais ducoup ne t'inquiètes pas je vais t'expliquer tout ça.
Lorsqu'on te montre un profil d'absorbance (Absorbance en fonction du temps) comme celui-ci (avec des acides aminés pour chaque pics ...) il s'agit alors d'une chromatographie échangeuse d'ions.
En chromatographie échangeuse d'ions tu as :
- un réservoir : contenant le solvant (dans lequel il y a les acides aminés) ==> phase mobile
- une colonnne : solide poreux ==> phase immobile
- un collecteur
Principe : en fonction du pHi des acides aminés, du pH de la solution et de la charge de la colonne, les AA vont être élués (=tomber dans le collecteur) séparément.

Sur le profil d'absorbance, à chaque fois qu'un AA est élué on observe un pic d'absorption.

Rappel :
- pH<pHi : AA chargé positivement (protoné)
- pH>pHi : AA chargé négativement (déprotoné)

Il existe 2 types de chromatographie échangeuse d'ions :

• Chromatographie échangeuse d'anions

Le solvant dans le réservoir est chargé négativement (pH = 10 > pHi de l'ensemble des AA)
La colonne est chargée positivement. Le solvant est retenu par la colonne.
Pour éluer petit à petit les AA, il faut qu'ils deviennent (+). Il faut donc baisser le pH pour que pH<pHi.
Ainsi le premier AA à être élué en chromatographie par échangeuse d'anions est celui avec le pHi le plus haut.
Dans l'exemple ci-dessus, l'AA élué en premier sera donc celui avec le pHi 3 (c'est le premier à devenir (+) lorsqu'on baisse le pH)

• Chromatographie échangeuse de cations

Le solvant dans le réservoir est chargé positivement (pH = 2 < pHi de l'ensemble des AA)
La colonne est chargée négativement. Le solvant est retenu par la colonne.
Pour éluer petit à petit les AA, il faut qu'ils deviennent (-). Il faut donc augmenter le pH pour que pH>pHi.
Ainsi le premier AA à être élué en chromatographie par échangeuse de cations est celui avec le pHi le plus bas.
Dans l'exemple ci-dessus, l'AA élué en premier sera donc celui avec le pHi 1 (c'est le premier à devenir (-) lorsqu'on baisse le pH)

Ooooooooooooook
Maintenant qu'on a les bases regardons le profil d'absorbance des acides aminés. Ici le premier AA a être élué dans le temps est le glutamate (Glu) (premier pic d'absorbance). Information a connaître, le glutamate est un AA très acide (sont pHi est très bas).
NB : L'acide aminé le + acide est l'aspartate.

Comment savoir si c'est une chromatographie échangeuse d'anions ou de cations ?
On a vu pour qu'un AA avec le pHi le plus bas soit élué en premier, il faut réaliser une chromatographie échangeuse de cations. On peut donc en déduire à partir du profil d'absorbance qu'il s'agit ici d'une chromatographie échangeuse de cations. Maintenant tu peux normalement répondre à tous les items à partir de ce que je t'ai dis

Si jamais tu n'as pas compris ou que tu as d'autres questions n'hésite pas
Toute la Bioch' te souhaite bon courage pour tes révisions !

Merci bcp pour ta réponse même si c pas moi qui ai posé la question!

Incroyable c'est beaucoup plus clair maintenant, merciiii beaucoup !